A tensão de oxigênio e a densidade de oócitos durante a maturação in vitro afeta a fecundação in vitro de oócitos bovinos

Resumo

A maturação dos oócitos é o fator chave que afeta a fecundação e o desenvolvimento embrionário. Fatores como a densidade de oócitos e a tensão de oxigênio podem influenciar diretamente a maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da associação da tensão de oxigênio (5% ou 20%) com diferentes densidades de oócitos (1:10?l ou 1:20?l) MIV de oócitos bovinos, na taxa de maturação, fecundação, produção de espécies reativas ao oxigênio (ROS) e defesas antioxidantes. Três experimentos foram conduzidos com oócitos obtidos de ovários de abatedouro. Após a seleção, os oócitos foram distribuídos homogeneamente em quatro tratamentos: 1:10/5%; 1:10/20%; 1:20/5% e 1:20/20%. No experimento I, o status da maturação nuclear e citoplasmática foram avaliados pela detecção do primeiro corpúsculo polar por epifluorescência e avaliação da reorganização das mitocôndrias. No experimento II, a produção de EROs e atividade antioxidante foram analisadas nos oócitos e no meio de MIV após 24h de maturação pela detecção de ROS, redução da glutationa (GSH) e atividade da Superoxido Dismutase por métodos de espectrofluorometria. No experimento III, foram avaliadas as taxas de fecundação pela formação dos pro-núcleos, penetração com ou sem descondensação espermática e poliespermia por epifluorescência. No experimento I, a maturação nuclear e citoplasmática foi similar entre os tratamentos (P>0,05). No experimento II, os níveis de ROS nos oócitos foram elevados nos tratamentos com baixa tensão de oxigênio (5%) independente da densidade de oócitos (P<0,05). Adicionalmente os níveis de ROS no meio de MIV foram maiores nos tratamentos com alta densidade de oócitos por volume de meio, independente da tensão de oxigênio (P<0,05). No experimento III, a taxa de fecundação e penetração espermática foi maior nos tratamentos com 20% de oxigênio e alta densidade de oócitos (P<0,05). Entretanto, alta incidência de polispermia foi observada nos grupos com alta tensão de oxigênio (20%) e baixa densidade de oócitos (1:20). Em conclusão, os resultados deste estudo indicam uma interação entre tensão de oxigênio e densidade de oócitos, que aumenta a produção de ROS em certas associações e consequentemente influencia as taxas de fecundação dos oócitos bovinos. O aumento nas taxas de fecundação é obtido utilizando uma tensão de 20% de oxigênio e alta densidade de oócitos (1:20 ul).