Análise comparativa de cinco protocolos de isolamento de DNA e três métodos de secagem de amostras foliares de Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez

Autores

  • Leonardo Severo da Costa Universidade Federal de Santa Maria
  • Lia Rejane Silveira Reiniger Universidade Federal de Santa Maria
  • Valdir Marcos Stefenon Universidade Federal do Pampa
  • Berta Maria Heinzmann Universidade Federal de Santa Maria
  • Adriel dos Santos Oliveira Universidade Federal de Santa Maria

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n3p1177

Palavras-chave:

CTAB, SDS, Custo, Qualidade, Rendimento.

Resumo

O objetivo do estudo foi estabelecer um protocolo de isolamento de DNA de Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez., capaz de obter amostras de alto rendimento e qualidade para emprego em análises genômicas. Foram testados um kit comercial e quatro métodos clássicos de extração de DNA, incluindo três métodos baseados em brometo de cetiltrimetilamónio (CTAB) e um baseado em dodecil sulfato de sódio (SDS). Três métodos de secagem de amostras de folhas foram também avaliados, incluindo a secagem à temperatura ambiente (RT), em estufa a 40ºC (S40), e em forno microondas (FMO). As soluções de DNA obtidas a partir de diferentes tipos de amostras foliares utilizando os cinco protocolos foram avaliadas em termos de custo, tempo de execução e qualidade e rendimento de DNA extraído. O kit comercial não extraiu DNA com quantidade ou qualidade suficiente para o sucesso das reações de PCR. Entre os métodos clássicos, apenas os protocolos Dellaporta e Khanuja proporcionaram extração de DNA para os três tipos de amostras foliares, que resultaram em reações de PCR e ensaios com enzimas de restrição bem sucedidos. Com base nas variáveis avaliadas, o método de extração de DNA mais apropriado para Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez. foi o Dellaporta, independentemente do método utilizado para secar as amostras. O método selecionado apresenta custo e tempo de execução total relativamente baixo. Além disso, a qualidade e quantidade do DNA extraído utilizando o método foram suficientes para amplificação de fragmentos de DNA por meio de reações de PCR e para obter fragmentos de restrição.

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Biografia do Autor

Leonardo Severo da Costa, Universidade Federal de Santa Maria

Discente do Curso de Doutorado do Programa de Pós-Graduação em Engenharia Florestal, Universidade Federal de Santa Maria, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil. Bolsista CNPq.

Lia Rejane Silveira Reiniger, Universidade Federal de Santa Maria

Profª Drª, Departamento de Fitotecnia, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil. Bolsista PQ/CNPq.

Valdir Marcos Stefenon, Universidade Federal do Pampa

Prof. Dr., Departamento de Ciências Rurais, Universidade Federal do Pampa, UNIPAMPA, São Gabriel, RS, Brasil.

Berta Maria Heinzmann, Universidade Federal de Santa Maria

Profª Drª, Departamento de Farmácia Industrial, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil. Bolsista PQ/CNPq.

Adriel dos Santos Oliveira, Universidade Federal de Santa Maria

Discente do Curso de Graduação em Tecnologia de Alimentos, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil.

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Publicado

2016-06-22

Como Citar

Costa, L. S. da, Reiniger, L. R. S., Stefenon, V. M., Heinzmann, B. M., & Oliveira, A. dos S. (2016). Análise comparativa de cinco protocolos de isolamento de DNA e três métodos de secagem de amostras foliares de Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez. Semina: Ciências Agrárias, 37(3), 1177–1188. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n3p1177

Edição

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