Clonagem, sequenciamento, expressão e caracterização do gene tsh de uma cepa de Escherichia coli patogênica de aves

Resumo

A hemaglutinina temperatura sensível (Tsh) pertence à família das serino-proteases autotransporte de Enterobacteriacea (SPATE), as quais são capazes de clivar diferentes substratos. Nós isolamos e caracterizamos o gene de Escherichia coli patogênica aviária (APEC) amostra APEC 13, sorotipo O2:H9,clonado em pET101. A região de 4.2 kb do DNA clonado codifificou uma proteína de aproximadamente 140 kDa (r-Tsh). O plasmídio recombinante pET101-tsh conferiu um fenótipo de hemaglutinação positivo para a linhagem BL21 (tsh-) para eritrócitos de galinha. A proteína r-Tsh foi purificada em coluna de níquel e utilizada na produção de anticorpos anti-Tsh. Um fragmento de 1.6 kb foi amplificado e subclonado em pCR4, e a seqüência parcial mostrou alta homologia com outras seqüências analisadas. O anti-Tsh reagiu com as proteínas r-Tsh e Tsh nativa da amostra APEC13, como demonstrado pela técnica de Western blot, mostrando que a r-Tsh tem epitopos conservados e que sua antigenicidade foi preservada. O anti-Tsh também inibiu a atividade hemaglutinante das amostras APEC13 e BL21/pET 101-tsh.