Filtração de ejaculados suínos como alternativa para a separação do plasma seminal
DOI:
https://doi.org/10.5433/1679-0359.2021v42n4p2439Palavras-chave:
Cachaço, Hiperatividade, Peroxidação lipídica, Sêmen, Sperm-filter.Resumo
O presente estudo objetivou avaliar a filtração como alternativa para a separação do plasma seminal de ejaculados suínos, ao considerar a viabilidade espermática por meio da ocorrência de hiperativação e peroxidação lipídica no sêmen fresco e após refrigeração por até 96 horas. O ejaculado, de oito cachaços saudáveis de diferentes raças, foram colhidos por meio da técnica da mão enluvada e porção gelatinosa foi separada e descartada. Em laboratório, o sêmen foi fracionado em três alíquotas (grupos G1, G2 e G3) da seguinte forma: G1: sêmen e plasma seminal, diluído em BTS (TOTAL BTS); G2: ejaculado centrifugado a 600G/10’ para separação do plasma seminal, e o pellet de espermatozoides formados foram ressuspensos em BTS (BTS CEN); e G3: sêmen filtrado com Sperm-filter®, e espermatozoides retidos foram diluídos em BTS (BTS FIL). As análises foram realizadas em três momentos: amostras frescas (D0), após 48 horas (D2) e seguidas 96 horas (D4) de refrigeração a 17ºC. A avaliação cinética foi realizada pelo sistema CASA, que forneceu dados para a classificação da hiperatividade espermática. Para análise de estresse lipídico, foi realizado o teste TBARS (substâncias reagente ao ácido barbitúrico). Um teste de análise de variâncias foi feito para detectar diferenças entre os grupos e momentos avaliados. Os resultados mostraram melhores valores de motilidade total (%) para G1 em D0 (67,9, P = 0,001), D2 (36,6, P = 0,004) e D4 (26,1, P = 0,003). A ocorrência de hiperatividade foi observada em G2 e G3 nos momentos D2 e D4. Além disso, o TBARS mostrou níveis de peroxidação lipídica mais elevados para G1 em D0 (8,1 mM MDA / ml, P = 0,01), D2 (7,4 mM MDA/ml, P = 0,02) e D4 (6,41 mMol MDA / ml, P = 0,008) quando comparado com G2 e G3. Como a filtração não induziu a danos na viabilidade espermática, o estudo concluiu que a filtração espermática é uma ferramenta acessível e válida para substituir a centrifugação com intuito de separar o plasma seminal.Referências
Albuquerque, R. S., Morais, R., Reis, A. N., Miranda, M. S., Dias, E. A. R., Monteiro, F. M., … Gimenes, L. U. (2017). Comparison of two methods of seminal plasma removal on buffalo (Bubalus bubalis) sperm cryopreservation. Reproduction in Domestic Animals, 52(5), 905-910. doi: doi.org/10.1111/rda.12992
Alkmin, D. V, Perez-patiño, C., Barranco, I., Parrilla, I., Vazquez, J. M., Martinez, E. A., … Roca, J. (2014). Cryobiology Boar sperm cryosurvival is better after exposure to seminal plasma from selected fractions than to those from entire ejaculate q. Cryobiology, 69(2), 203-210. doi: 10.1016/j.cryobiol.2014.07.004
Alvarenga, M A, Melo, C. M., Magalhães, L. C. O., & Papa, F. O. (2010). A new method to concentrate equine sperm. Animal Reproduction Science, 121(S), 186-187. doi: 10.1016/j.anireprosci.2010.04.142
Alvarenga, Marco Antonio, Papa, F. O., Carmo, M. T., Kievitsbosch, T., Castro Chaves, M. M. B., & Ramires Neto, C. (2012). Methods of Concentrating Stallion Semen. Journal of Equine Veterinary Science, 32(8), 424-429. doi: 10.1016/j.jevs.2012.06.003
Awda, B. J., Mackenzie-Bell, M., & Buhr, M. M. (2009). Reactive Oxygen Species and Boar Sperm Function1. Biology of Reproduction, 81(3), 553–561. https://doi.org/10.1095/biolreprod.109.076471
Barreiros, A. L. B. S., David, J. M., & David, J. P. (2006). Estresse oxidativo: Relação entre geração de espécies reativas e defesa do organismo. Quimica Nova, 29(1), 113-123. doi: 10.1590/s0100-40422006 000100021
Bergstein-Galan, T. G., Weiss, R. R., Bertol, M. A. F., Abreu, A. C. M. R., Busato, E., Kozicki, L. E., & Bicudo, S. D. (2017). Quality and fertility of frozen ovine spermatozoa from epididymides stored at room temperature (18–25 °C) for up to 48 h post mortem. Theriogenology, 96(17), 69-75. doi: 10.10 16/j.theriogenology.2017.04.001
Bianchi, I., Calderam, K., Maschio, É. F., Madeira, E. M., da Rosa Ulguim, R., Corcini, C. D., … Corrêa, M. N. (2008). Evaluation of amides and centrifugation temperature in boar semen cryopreservation. Theriogenology, 69(5), 632-638. doi: 10.1016/j.theriogenology.2007.11.012
Campanholi, S. P., Monteiro, F. M., Ribeiro Dias, E. A., Mercadante, M. E. Z., de Paz, C. C. P., Dell’Aqua Junior, J. A., … Garcia, J. M. (2017). Effect of seminal plasma removal before cryopreservation of bovine semen obtained by electroejaculation on semen quality and in vitro fertility. Theriogenology, 89(16), 114-121. doi: 10.1016/j.theriogenology.2016.10.008
CBRA. (2013). Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. (3rd ed.). Belo Horizonte: Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.
Gadea, J., Martínez-Miró, S., Decuadro-Hansen, G., & Matás, C. (2006). 92 Evaluation of Boar Sperm Functionality After a Cushioned Centrifugation Technique. Reproduction, Fertility and Development, 18(2), 154. doi: 10.1071/rdv18n2ab92
Gómez-Fernández, J., Gómez-Izquierdo, E., Tomás, C., Mocé, E., & Mercado, E. de. (2012). Effect of different monosaccharides and disaccharides on boar sperm quality after cryopreservation. Animal Reproduction Science, 133(1-2), 109-116. doi: 10.1016/j.anireprosci.2012.06.010
Hallap, T., Ha, M., Larsson, B., & Rodriguez-martinez, H. (2004). Does cleansing of frozen-thawed bull semen before assessment provide samples that relate better to potential fertility ? Theriogenology, 62 (04), 702-713. doi: 10.1016/j.theriogenology.2003.11.017
Hancock, G. L. (1959). The morphologic characteristics of spermatozoa and fertility. Internacional Journal of Fertility, 4, 347-359.
Hurtado de Llera, A., Gil, M. C., Bragado, M. J., Martin-Hidalgo, D., Garcia-Marin, L. J., & Perez, C. J. (2018). Boar sperm hyperactivated motility is induced by temperature via an intracellular calcium-dependent pathway. Reproduction, Fertility and Development, 30(11), 1462. doi: 10.1071/rd17549
Juyena, N. S., & Stelletta, C. (2012). Seminal Plasma : An Essential Attribute to Spermatozoa. 33(4), 536-551. doi: 10.2164/jandrol.110.012583
Larentis, G. R., Camozzato, G. C., Bastos, H. B. A., Gregory, R. M., & Mattos, R. C. (2018). Equine Sperm Selection by Synthetic Membrane Filter. Journal of Equine Veterinary Science, 63 (17), 69-73. doi: 10. 1016/j.jevs.2018.01.013
Li, J., Roca, J., Pérez-patiño, C., Barranco, I., & Martinez, E. A. (2018). Is boar sperm freezability more intrinsically linked to spermatozoa than to the surrounding seminal plasma ? Animal Reproduction Science, 195(5), 30-37. doi: 10.1016/j.anireprosci.2018.05.002
Luna, C., Yeste, M., Rivera Del Alamo, M. M., Domingo, J., Casao, A., Rodriguez-Gil, J. E., … Muiño-Blanco, T. (2017). Effect of seminal plasma proteins on the motile sperm subpopulations in ram ejaculates. Reproduction, Fertility and Development, 29(2), 394-405. doi: 10.1071/RD15231
Menegat, M. B., Mellagi, A. P. G., Bortolin, R. C., Menezes, T. A., Vargas, A. R., Bernardi, M. L., … Bortolozzo, F. P. (2017). Sperm quality and oxidative status as affected by homogenization of liquid-stored boar semen diluted in short- and long-term extenders. Animal Reproduction Science, 179(17), 67-79. doi: 10.1016/j.anireprosci.2017.02.003
Muiño, R., Rivera, M. M., Rigau, T., Rodriguez-Gil, J. E., & Peña, A. I. (2008). Effect of different thawing rates on post-thaw sperm viability, kinematic parameters and motile sperm subpopulations structure of bull semen. Animal Reproduction Science, 109(1-4), 50-64. doi: 10.1016/j.anireprosci.2007.11.028
Nogueira, B. G., Bitencourt, J. L., Sampaio, B. F. B., Bender, E. S. C., Costa e Silva, E. V., & Zúccari, C. E. S. N. (2014). Peroxidação lipídica e agentes antioxidantes no sêmen de mamíferos. Revista Electronica de Veterinaria, 15(1), 1-15. Recuperado de https://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n010114
Okazaki, T., Abe, S., Yoshida, S., & Shimada, M. (2009). Seminal plasma damages sperm during cryopreservation , but its presence during thawing improves semen quality and conception rates in boars with poor post-thaw semen quality. Theriogenology, 71(9), 491-498. doi: 10.1016/j. theriogenology.2008.08.014
Pavaneli, A. P. P., Passarelli, M. da S., de Freitas, F. V., Ravagnani, G. M., Torres, M. A., Martins, S. M. M. K., … de Andrade, A. F. C. (2019). Removal of seminal plasma prior to liquid storage of boar spermatozoa: A practice that can improve their fertilizing ability. Theriogenology, 125(19), 79-86. doi: 10.1016/j.theriogenology.2018.10.020
Pedrazzi, C., Monteiro, G. A., Ramires Neto, C., Soares, R. F., Papa, F. O., Dell’aqua, J. A., & Alvarenga, M. A. (2012). Effect of removing seminal plasma using a sperm filter on the viability of refrigerated stallion semen. Journal of Equine Veterinary Science, 33(1), 40-43. doi: 10.1016/j. jevs.2012.04.008
Perez-patiño, C., Barranco, I., Parrilla, I., Valero, M. L., Martinez, E. A., Rodriguez-martinez, H., & Roca, J. (2016). Characterization of the porcine seminal plasma proteome comparing ejaculate portions. Journal of Proteomics, 142(16), 15-23. doi: 10.1016/j.jprot.2016.04.026
Placer, Z. A., Cushman, L. L., & Johnson, B. C. (1966). Estimation of product of lipid peroxidation (malonyl dialdehyde) in biochemical systems. Analytical Biochemistry, 16(2), 359-364. doi: 10.1016/0003-2697 (66)90167-9
Ramires, C., Augusto, G., Fatima, R., Pedrazzi, C., Antonio, J., Ozanan, F., & Antonio, M. (2013). Effect of removing seminal plasma using a sperm filter on the viability of refrigerated stallion semen. Journal of Equine Veterinary Science, 33(1), 40-43. doi: 10.1016/j.jevs.2012.04.008
Ribeiro, C. D. V., Moroni, J. L., & Menegat, M. B. (2016). Redalyc. The influence of air contact on the quality of extended boar semen. Acta Scientiae Veterinariae, 44(1), 1-7. doi: 10.22456/1679-9216.81 300
Saravia, F., Wallgren, M., Johannisson, A., Calvete, J. J., Sanz, L., & Pen, F. J. (2009). Exposure to the seminal plasma of different portions of the boar ejaculate modulates the survival of spermatozoa cryopreserved in MiniFlatPacks. Theriogenology, 71(9), 662-675. doi: 10.1016/j.theriogenology.2008 .09.037
Sobolewski, P., Kandel, J., & Eckmann, D. M. (2012). Air bubble contact with endothelial cells causes a calcium-independent loss in mitochondrial membrane potential. Plos One, 7(10), 1-8. doi: 10.1371/ journal.pone.0047254
Souza, F. C., Melanda, C. A. A., Zandonadi, F., Morotti, F., Martins, M. I. M., Silva, C. A., & Seneda, M. M. (2013). Análise do movimento espermático suíno submetido a refrigeração por até 96 horas em diferentes meios de diluição. 22° Encontro Anual de Iniciação Científica (EAIC) e 3° Encontro Anual de Iniciação Tecnológica e Inovação (EAITI), Londrina, PR, Brasil 22, 3.
Wasilewska, K., & Fraser, L. (2017). Boar variability in sperm cryo-tolerance after cooling of semen in di ff erent long-term extenders at various temperatures. Animal Reproduction Science, 185(8), 161-173. doi: 10.1016/j.anireprosci.2017.08.016
Yeste, M. (2016). Theriogenology Sperm cryopreservation update : Cryodamage, markers, and factors affecting the sperm freezability in pigs. Theriogenology, 85(1), 47-64. doi: 10.1016/j.theriogenology. 2015.09.047
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