Identificação de Brachyspira spp. em cecos de frangos de corte por meio de histologia e ensaios diagnósticos in situ

Autores

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2021v42n5p2813

Palavras-chave:

Espiroquetose intestinal aviária, Enterite, Diagnóstico, Histologia, Imuno-Histoquímica, Hibridização fluorescente in situ, Brachyspira spp., Frango de corte.

Resumo

O gênero Brachyspira corresponde ao grupo de bactérias anteriormente classificadas no gênero Serpulina e inclui várias espiroquetas intestinais comensais e patogênicas que afetam suínos, aves e outras espécies animais, incluindo humanos. Em aves, algumas espécies patogênicas desse gênero causam uma condição conhecida como espiroquetose intestinal aviária, que permanece sub-diagnosticada, causando sérios prejuízos econômicos. Brachyspira é um organismo fastidioso que necessita do emprego de técnicas de identificação rápidas e eficientes. O objetivo deste estudo foi identificar Brachyspira spp. usando histologia, imunohistoquímica (IHQ) e hibridização fluorescente in situ (FISH) em amostras de tecido fixado em formalina e embebido em parafina (TFEP) do ceco de aves comerciais. As amostras foram coletadas de 129 aves com idades entre 35 e 45 dias em granjas comerciais. Para avaliação, o processamento histológico de rotina (H&E) e a técnica histoquímica, ácido periódico-Schiff (PAS) foram realizados. Além disso, as amostras de tecido TFEP foram avaliadas para FISH e IHC. As lesões histológicas foram analisadas e graduadas após coloração H&E, e as células caliciformes contadas e comparadas pela coloração PAS com as amostras positivas e negativas obtidas por FISH e IHC. Para FISH, foram utilizadas sondas marcadas com Brachyspira spp., B. pilosicoli, B. hyodysenteriae e B. intermedia, enquanto o anticorpo policlonal de coelho específico para Brachyspira spp. foi usado para IHC. De 129 amostras, 82 foram positivas com IHC e 86 foram positivas com FISH. As amostras positivas para o gênero Brachyspira pela técnica de FISH foram testadas para B. pilosicoli, B. hyodysenteriae e B. intermedia, sendo 56 positivas para B. pilosicoli, 75 para B. hyodysenteriae e 80 para B. intermedia. Houve aumento de células caliciformes nas amostras positivas para FISH e IHC. As técnicas utilizadas foram eficazes e deram os resultados correspondentes, servindo assim como uma ferramenta de diagnóstico rápida e eficiente.

Biografia do Autor

Monica Regina de Matos, Universidade Federal do Paraná

Dr. em Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia, Universidade Federal do Paraná, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Aline Patrícia Grzegozevski, Universidade Federal do Paraná

Discente de Medicina Veterinária, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Alessandra da Cruz, Universidade Federal do Paraná

Discente de Medicina Veterinária, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Arthur Colombari Cheng, Universidade Federal do Paraná

Discente de Medicina Veterinária, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Amanda Gerelli, Universidade Federal do Paraná

Discente de Medicina Veterinária, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Carla Fusco, Universidade Federal do Paraná

Discente de Medicina Veterinária, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Leonardo Gruchouskei, Universidade Federal da Fronteira Sul

Técnico em Veterinária Anatômica, Universidade Federal da Fronteira Sul, UFFS, Realeza, PR, Brasil.

Aline de Marco Viott, Universidade Federal do Paraná

Profa Dra, Curso de Graduação em Medicina Veterinária, UFPR, Palotina, PR, Brasil.

Referências

Backhans, A., Jansson, D. S., Aspan, A., & Fellstrӧm, C. (2011). Typing of Brachyspira spp. from rodents, pigs and chickens on Swedish farms. Veterinary Microbiology, 153(1-2), 156-162. doi: 10.1016/j. vetmic.2011.03.023

Boye, M., Jensen, T. K., Møller, K., Leser, T. D., & Jorsal, S. E. (1998). Specific detection of the genus Serpulina, S. hyodysenteriae and S. pilosicoli in porcine intestines by fluorescent rRNA in situ hybridization. Molecular and Cellular Probes, 12(5), 323-330. doi: 10.1006/mcpr.1998

Burrough, E. R., Strait, E. L., Kinyon, J. M., Bower, L. P., Madson, D. M., Wilberts, B. L., Songer, J. G. (2012). Comparative virulence of clinical Brachyspira spp. isolates in inoculated pigs. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 24(6), 1025-1034. doi: 10.1177/1040638712457927

Cooper, M., & Lummas, S. (2017). Antibodies for immunohistochemistry. In Immunohistochemistry and immunocytochemistry essential methods (2nd ed., p. 1-24). Chennai: Wiley Blackwell. Retrieved from https://books.google.com.br/books?id=LPAjDgAAQBAJ&dq=Antibodies+for+ Immunohistochemistry +in+Immunohistochemistry+and+Immunocytochemistry+Essential+Methods&hl=en-BR&lr

Culling, C. F. A., Allison, R. T., & Barr, W. T. (1985). Cellular pathology technique (4nd ed.). Vancouver, Canada: Butterworth & Co. Ltd.

Feberwee, A., Hampson, D. J., Phillips, N. D., La, T., Van Der Heijden, H. M. J. F., Wellenberg, G. J., ... Landman, W. J. M. (2008). Identification of Brachyspira hyodysenteriae and other pathogenic Brachyspira species in chickens from laying flocks with diarrhea or reduced production or both. Journal of Clinical Microbiology, 46(2), 593-600. doi: 10.1128/JCM.01829-07

Hampson, D. J., Fellstron, M. C., & Thomson, J. R. (2006). Swine dysentery. In Diseases of swine (9nd ed., pp. 785-805). Ames, Iowa: Blackwell Publishing.

Hess, C., Zloch, A., Bilic, I., Hacksteiner, K., Kuchling, S., & Hess, M. (2017). High prevalence of Brachyspira spp. in layers kept in alternative husbandry systems associated with frequent species variations from end of rearing to slaughter. Avian Pathology, 46(5), 481-487. doi: 10.1080/03079457. 2017.1315049

Illanes, N. V., Tamiozzo, P. J., Cabral, A., Bertone, J., Romanini, S., Yaciuk, R, Pelliza, B. R. (2016). Detection of Brachyspira pilosicoli and other Brachyspira species in Argentine poultry farms. Revista Argentina de Microbiología, 48(1), 67-70. doi: 10.1016/j.ram.2015.12.002

Jensen, N. S., Stanton, T. B., & Swayne, D. E. (1996). Identification of the swine pathogen Serpulina hyodysenteriae in rheas (Rhea americana). Veterinary Microbiology, 52(3-4), 259-269. doi: 10.1016/S 0378-1135(96)00076-4

Mappley, L. J., La Ragione, R. M., & Woodward, M. J. (2014). Veterinary Microbiology, 168(2-4), 245-260. doi: 10.1016/j.vetmic.2013.11.019

Medhanie, G. A., McEwen, S. A., Weber, L., Sanei, B., Cooley, L., Houghton, S., Guerin, M. T. (2013). Risk factors associated with the colonization of Ontario layer chicken flocks with Brachyspira species. Preventive Veterinary Medicine, 109(3-4), 304- 311. doi: 10.1016/j.prevetmed.2012.09.017

Moter, A., & Göbel, U. B. (2000). Fluorescence in situ hybridization (FISH) for direct visualization of microorganisms. Journal Microbiology Methods, 41(2), 85-112. doi: 10.1016/s0167-7012(00)00152-4

Paulovich, F. B., Borowski, S. M., Driemeier, D., Razia, L. E., Coutinho, T. A., Prates, A. B. H.,… Barcellos, D. E. S. N. (2004). Evaluation of the pathogenicity of Brachyspira pilosicoli strains by conventional histopathological techniques and by immunohistochemistry. Pesquisa Veterinária Brasileira, 24(3), 144-148. doi: 10.1590/s0100-736x2004000300005

Phillips, N. D., La, T., & Hampson, D. J. (2006). Development of a two-step nested duplex PCR assay for the rapid detection of Brachyspira pilosicoli and Brachyspira intermedia in chicken faeces. Veterinary Microbiology, 116(1-3), 239-245. doi: 10.1016/j.vetmic.2006.03.020

Porter, R. E. (1998). Bacterial enteritides of poultry. Poultry Science, 77(8), 1159-1165. doi: 10.1093/ps/77. 8.1159

Pusztai, A., & Greer, F. (1984). Effect of dietary legume proteins on the morphology and secretory responses to the rat small intestine. Protides of the Biological Fluids,32, 347-350. doi: 10.1016/B978-0-08-03173 9-7.50088-4

Rojas, P., Petrich, A., Schulze, J., Wiessner, A., Loddenkemper, C., Epple, H. J.,... Moter, A. (2017). Distribution and phylogeny of Brachyspira spp. in human intestinal spirochetosis revealed by FISH and 16S rRNA-gene analysis. Anaerobe, 47, 25-32. doi: 10.1016/j.anaerobe.2017.03.012

Schmiedel, D., Epple, H. J., Loddenkemper, C., Ignatius, R., Wagner, J., Hammer, B.,... Moter, A. (2009). Rapid and accurate diagnosis of human intestinal spirochetosis by fluorescence in situ hybridization. Journal of Clinic Microbiology, 47(5), 1393-1401. doi: 10.1128/JCM.02469-08.

Shivaprasad, H. L., & Duhamel, G. E. (2005). Cecal spirochetosis caused by Brachyspira pilosicoli in commercial turkeys. Avian Diseases, 49(4), 609-613. doi: 10.1637/7383-052005.1.

Song, Y., & Hampson, D. J. (2009). Development of a multiplex qPCR for detection and quantitation of pathogenic intestinal spirochaetes in the faeces of pigs and chickens. Veterinary Microbiology, 137(1-2), 129-136. doi: 10.1016/j.vetmic.2008.12.020

Tolosa, E. M. C., Rodrigues, C. J., Behmer, O. A., & Freitas, A. G., Neto. (2003). Manual de técnicas para histologia normal e pathologia (2a ed., pp. 20-41). Barueri: Manole.

Venkatakrishnan, V., Quintana-Hayashi, M. P., Mahu, M., Haesebrouck, F., Pasmans, F., & Lindén, S. K. (2017). Brachyspira hyodysenteriae infection regulates mucin glycosylation synthesis inducing an increased expression of core-2 o-glycans in porcine colon. Journal of Proteome Research, 16(4), 1728-1742. doi: 10.1021/acs.jproteome.7b00002

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Publicado

2021-07-02

Como Citar

Matos, M. R. de, Grzegozevski, A. P., Cruz, A. da, Cheng, A. C., Gerelli, A., Fusco, C., … Viott, A. de M. (2021). Identificação de Brachyspira spp. em cecos de frangos de corte por meio de histologia e ensaios diagnósticos in situ. Semina: Ciências Agrárias, 42(5), 2813–2824. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2021v42n5p2813

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