Avaliação de parâmetros cinéticos de quitinases produzidas por Beauveria bassiana (Bals.) Vuill.

Autores

  • Danieli Cristina Sassá Universidade Estadual de Londrina
  • Geni Varéa-Pereira Universidade Estadual de Londrina
  • Dalva Tomoe Miyagui Universidade Estadual de Londrina
  • Pedro Manoel de Oliveira Janeiro Neves Universidade Estadual de Londrina
  • Jo I Wu
  • Vanessa Hitomi Sugahara
  • Cristiane Mita
  • Evelyn Kamogawa

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2008v29n4p807

Palavras-chave:

Fungos entomopatogênicos, Biocontrole, Hypothenemus hampei.

Resumo

Beauveria bassiana é um fungo entomopatogênico utilizado no controle biológico de insetos-praga que infestam produtos agrícolas. O mecanismo de infecção envolve a produção de enzimas extracelulares, como proteases e quitinases que degradam a cutícula dos insetos. O objetivo deste trabalho foi avaliar parâmetros cinéticos de pH, temperatura, concentração iônica e tempo de reação sobre a atividade de quitinases. O fungo B. bassiana CG432 foi repicado em broca do café Hypothenemus hampei (Ferrari) e utilizado para preparar o inóculo contendo 108conídios ativados/mL. Estes conídios foram inoculados 1% (v/v) em meio de cultura líquido constituído por D-glicose (10g), extrato de levedura (5g), NaNO3 (1,58g), Na2HPO4.7H2O (1,05g), KCl (1g), MgSO4.7H2O (0,6g) e KH2PO4 (0,36g) por litro. O cultivo foi conduzido a 28°C e 180rpm durante 5 dias. O fluido extracelular do cultivo foi obtido por filtração e centrifugação a 8.000g, e as quitinases foram isoladas e concentradas por ultrafiltração entre membranas de 10 e 100kDa sob pressão de nitrogênio. A atividade das quitinases foi determinada pela quantificação da N-acetilglicosamina liberada pela hidrólise da quitina coloidal durante 60 minutos de incubação a temperaturas de 40 a 60ºC, concentrações iônicas dos tampões acetato de sódio pH 4,0 a 6,0; fosfato de sódio pH 6,0 a 8,0; e glicina-NaOH pH 8,0 a 10,0, a 50, 100 e 200 mM. A atividade das quitinases foi máxima a 45ºC, em pH 5,5, mas também foi elevada em pH 6,0 e 8,5 em concentração iônica de 50mM. A atividade de quitinases aumentou durante uma hora de incubação demonstrando estabilidade das enzimas nas condições ótimas da reação.

 

 

 

 

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Biografia do Autor

Danieli Cristina Sassá, Universidade Estadual de Londrina

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia/CCE/Universidade Estadual de Londrina.

 

 

 

 

Geni Varéa-Pereira, Universidade Estadual de Londrina

Departamento de Bioquímica e Biotecnologia/CCE/Universidade Estadual de Londrina Campus Universitário, Caixa Postal 6001, CEP 86081-990, Londrina-Pr, Brasil, fone (43) 33714270.

Dalva Tomoe Miyagui, Universidade Estadual de Londrina

Departamento de Bioquímica e Biotecnologia/CCE/Universidade Estadual de Londrina Campus Universitário, Caixa Postal 6001, CEP 86081-990, Londrina-Pr, Brasil, fone (43) 33714270.

Pedro Manoel de Oliveira Janeiro Neves, Universidade Estadual de Londrina

Departamento de Agronomia/CCA/Universidade Estadual de Londrina Suporte financeiro: CAPES, CNPq, Fundação Araucária/Pr.

 

 

 

 

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Publicado

2008-08-30

Como Citar

Sassá, D. C., Varéa-Pereira, G., Miyagui, D. T., Neves, P. M. de O. J., Wu, J. I., Sugahara, V. H., Mita, C., & Kamogawa, E. (2008). Avaliação de parâmetros cinéticos de quitinases produzidas por Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. Semina: Ciências Agrárias, 29(4), 807–814. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2008v29n4p807

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