Clonagem, sequenciamento, expressão e caracterização do gene tsh de uma cepa de Escherichia coli patogênica de aves

Autores

  • Rita de Cássia Simões Universidade Estadual de Londrina
  • Renata K. T. Kobayashi Universidade Estadual de Londrina
  • Luis Carlos J. Gaziri Universidade Estadual de Londrina
  • Marilda C. Vidotto Universidade Estadual de Londrina

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2006v27n2p253

Palavras-chave:

Escherichia coli aviária, Hemaglutinina temperatura sensível (Tsh), Aderência, Fator.

Resumo

A hemaglutinina temperatura sensível (Tsh) pertence à família das serino-proteases autotransporte de Enterobacteriacea (SPATE), as quais são capazes de clivar diferentes substratos. Nós isolamos e caracterizamos o gene de Escherichia coli patogênica aviária (APEC) amostra APEC 13, sorotipo O2:H9,clonado em pET101. A região de 4.2 kb do DNA clonado codifificou uma proteína de aproximadamente 140 kDa (r-Tsh). O plasmídio recombinante pET101-tsh conferiu um fenótipo de hemaglutinação positivo para a linhagem BL21 (tsh-) para eritrócitos de galinha. A proteína r-Tsh foi purificada em coluna de níquel e utilizada na produção de anticorpos anti-Tsh. Um fragmento de 1.6 kb foi amplificado e subclonado em pCR4, e a seqüência parcial mostrou alta homologia com outras seqüências analisadas. O anti-Tsh reagiu com as proteínas r-Tsh e Tsh nativa da amostra APEC13, como demonstrado pela técnica de Western blot, mostrando que a r-Tsh tem epitopos conservados e que sua antigenicidade foi preservada. O anti-Tsh também inibiu a atividade hemaglutinante das amostras APEC13 e BL21/pET 101-tsh.

Biografia do Autor

Rita de Cássia Simões, Universidade Estadual de Londrina

Universidade Estadual de Londrina, Depto de Medicina Veterinaria Preventiva-CCA Campus Universitário, Londrina, Pr.

Renata K. T. Kobayashi, Universidade Estadual de Londrina

Universidade Estadual de Londrina, Depto de Medicina Veterinaria Preventiva-CCA Campus Universitário, Londrina, Pr.

Luis Carlos J. Gaziri, Universidade Estadual de Londrina

Universidade Estadual de Londrina, Depto de Medicina Veterinaria Preventiva-CCA Campus Universitário, Londrina.

 

Marilda C. Vidotto, Universidade Estadual de Londrina

Universidade Estadual de Londrina, Depto de Medicina Veterinaria Preventiva-CCA Campus Universitário, Londrina, Pr- Brasil.

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Publicado

2006-06-30

Como Citar

Simões, R. de C., Kobayashi, R. K. T., Gaziri, L. C. J., & Vidotto, M. C. (2006). Clonagem, sequenciamento, expressão e caracterização do gene tsh de uma cepa de Escherichia coli patogênica de aves. Semina: Ciências Agrárias, 27(2), 253–260. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2006v27n2p253

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