Aplicação da reação em cadeia da polimerase na detecção da infecção por Leishmania sp. em equinos

Autores

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2020v41n1p199

Palavras-chave:

Leishmania infantum, Métodos diagnósticos, Infecção, Cavalos.

Resumo

A leishmaniose é uma doença zoonótica negligenciada, causada por uma diversidade de espécies patogênicas de Leishmania. No Novo Mundo, especialmente no Brasil, a leishmaniose visceral é causada pelo protozoário Leishmania infantum. A infecção acomete várias espécies animais (cães, raposas, roedores, primatas, felinos, equinos) e humanos e o cão é o principal reservatório doméstico. Este estudo teve como objetivo utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar a infecção por Leishmania sp. em cavalos que vivem em uma região endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC). Amostras de DNA do sangue periférico de equinos foram utilizadas para extração de DNA e PCR. As amplificações foram realizadas utilizando-se marcadores para a região do DNA do cinetoplasto (kDNA), que são capazes de detectar diferentes espécies de Leishmania sp. e a região dos espaçadores internos transcritos (ITS) do DNA ribossomal para detecção da família Trypanosomatidae. Dentre os 192 animais testados, 75 (39%) amostras foram positivas no PCR, 21 amostras foram positivas para PCR kDNA e 63 para os genes ITS, ITS1 e ITS2. O sequenciamento dos amplicons permitiu detectar L. infantum em amostras de sangue periférico de equinos. Este foi o primeiro relato de infecção por L. infantum no sul do Brasil na espécie equina. Os resultados demonstram que, assim como nos países europeus, a infecção foi detectada em equinos após ter sido identificada em seres humanos e cães, o que indica a urgência em acompanhar a investigação da infecção nessa espécie animal.

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Biografia do Autor

Taiane Acunha Escobar, Universidade Federal do Pampa

Dra. em Bioquímica, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Universidade Federal do Pampa, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Gabriela Döwich, Universidade Federal do Pampa

Discente de Mestrado, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Letícia Carvalho Cantele, Universidade Federal do Pampa

Médica Veterinária, Graduação em Medicina Veterinária, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Geórgia Camargo Góss, Universidade Federal do Pampa

Discente de Mestrado, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Marcelo Lameiro Porciúncula, Universidade da Região da Campanha

Prof., Curso de Medicina Veterinária, Universidade da Região da Campanha, URCAMP, Alegrete, RS, Brasil.

Carla Teixeira Leite, Universidade Estadual Paulista

Drª em Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Universidade Estadual Paulista, UNESP, Jaboticabal, SP, Brasil.

Luísa Zuravski, Universidade Federal do Pampa

Dra. em Bioquímica, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Universidade Federal do Pampa, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Claudia Acosta Duarte, Universidade Federal do Pampa

Profa., Curso de Graduação em Medicina Veterinária, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Irina Lubeck, Universidade Federal do Pampa

Profa., Curso de Graduação em Medicina Veterinária, UNIPAMPA, Uruguaiana, RS, Brasil.

Referências

Akhoundi, M., Downing, T., Votýpka, J., Kuhls, K., Lukeš, J., Cannet,… Kasbari, M. (2017). Leishmania infections: molecular targets and diagnosis. Molecular Aspects of Medicine, 57, 1-29. doi: 10.1016/j.mam.2016.11.012

Almeida, A. B., Sousa, V. R., Gasparetto, N. D., Silva, G. F. da, Figueiredo, F. B., Dutra, V., . . . Madeira, M. F. (2013). Canine visceral leishmaniasis: diagnostic approaches based on polymerase chain reaction employing different biological samples. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 76(3), 321-324. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2013.03.017

Belo, V. S., Werneck, G. L., Barbosa, D. S., Simões, T. C., Nascimento, B. W. L., Silva, E. S. da, & Struchiner, C. J. (2013). Correction: factors associated with visceral leishmaniasis in the americas: a systematic review and meta-analysis. PLoS Neglected Tropical Diseases, 7(5). doi: 10.1371/annotation/83856044-8747-4d93-9a1e-64f16bb60c07

Benassi, J. C., Benvenga, G. U., Ferreira, H. L.; Pereira, V. F., Keid, L. B., Soares, R.,… Oliveira, T. M. F.S. (2017). Detection of Leishmania infantum DNA in conjunctival swabs of cats by quantitative real-time PCR. Experimental Parasitology, 177, 93-97. doi: 10.1016/j.exppara.2017.04.004

Bigeli, J. G., Oliveira Júnior, W. P. de, & Teles, N. M. M. (2012). Diagnosis of Leishmania (Leishmania) chagasi infection in dogs and the relationship with environmental and sanitary aspects in the municipality of Palmas, state of Tocantins, Brazil. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 45(1),18-23. doi: 10.1590/S0037-86822012000100005

Ministério da Saúde. (2014). Manual de vigilância e controle da leishmaniose visceral. Brasília: Ministério da Saúde - Divisão de Vigilância Epidemiológica.

Brito, C. F. P. C., & Pita-Pereira, D. (2014). Diagnóstico molecular de Leishmania spp. em Flebótomos provenientes de áreas de ocorrência de leishmanioses. In F. da Conceição-Silva & C. R. Alves. Leishmanioses do continente americano (Chap. 13, pp. 217-231). Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ.

Cortes, S.; Rolão, N.; Ramada, J., & Campino, L. (2004). PCR as a rapid and sensitive tool in the diagnosis of human and canine leishmaniasis using Leishmania donovani sl-specific kinetoplastid primers. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 98(1), 12-17. doi: 10.1016/S0035-9203(03)00002-6

Dantas-Torres, F. (2009). Canine leishmaniosis in South America. Parasites & Vectors, 2(1), S1. doi: 10.1186/1756-3305-2-S1-S1

Deboni, S. C., Barbosa, M., & Ramos, R. R. (2011). Leishmaniose Visceral no Rio Grande do Sul. Boletim Epidemiológico, 13 (1), 1-8. Retrived from: https://www.cevs.rs.gov.br/upload/arquivos/ 201812/27124724-n-1-marco.pdf

Echchakery, M., Chicharro, C., Boussaa, S., Nieto, J., Carrillo, E., Sheila, O.,… Boumezzough, A. (2017). Molecular detection of Leishmania infantum and Leishmania tropica in rodent species from endemic cutaneous leishmaniasis areas in Morocco. Parasites & Vectors, 10(1), 454-462. doi: 10.1186/s13071-017-2398-8

El Tai, N., Osman, O., El Fari, M., Presber, W., & Schönian, G. (2000). Genetic heterogeneity of ribosomal internal transcribed spacer in clinical samples of Leishmania donovani spotted on filter paper as revealed by single-strand conformation polymorphisms and sequencing. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 94(5), 575-579. doi: 10.1016/S0035-9203(00)90093-2

El Tai, N. O., El Fari, M., Mauricio, I., Miles, M. A., Oskam, L., El Safi, S. H.,… Schönian, G. (2001). Leishmania donovani: intraspecific polymorphisms of Sudanese isolates revealed by PCR-based analyses and DNA sequencing. Experimental Parasitology, 97(1), 35-44. doi: 10.1006/expr.2001.4592

Escobar, T. A., Döwich, G., Zuravski, L., Cantele, L. C., Duarte, C. A., & Lübeck, I. (2018). Risk factors associated to canine visceral leishmaniasis in Uruguaiana city, Brazil. Semina: Ciências Agrárias, 39(1), 211-219. Retrived from http://dx.doi.org/10.5433/1679-0359.2018v39n1p211

Feitosa, F. L. F., Leal, J., Mendes, L. C. N., Peiro, J. R., Perri, S. H. V., Lima, V. M. F. de,... Marcondes, M. (2012). Estudo soroepidemiológico de leishmaniose em equinos na região de Araçatuba-SP, Brasil, área endêmica para leishmaniose visceral. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 49(6), 500-502. Retrived from http://dx.doi.org/10.11606/issn.1678-4456.v49i6p500-502

Fernández-Bellon, H., Solano-Gallego, L., Bardagí, M., Alberola, J., Ramis, A., & Ferrer, L. (2006). Immune response to Leishmania infantum in healthy horses in Spain. Veterinary Parasitology, 135(2),181-185. Retrived from https://dx.doi.org/1016/j.vetpar.2005.09.007

Figueiredo, F., & Madeira, M. de F. (2014). Os parasitos e a questão da infecção em animais domésticos e domiciliados. In F. da Conceição-Silva & C. R. Alves. Leishmanioses do continente americano (Chap. 15, pp. 259-273). Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ.

Gama, A., Elias, J., Ribeiro, A. J., Alegria, N., Schallig, H. D., Silva, F.,... Cotovio, M. (2014). Cutaneous leishmaniosis in a horse from northern Portugal. Veterinary Parasitology, 200(1), 189-192. Retrived from https://dx.doi.org/10.1016/j.vetpar.2013.12.005

Koehler, K., Stechele, M., Hetzel, U., Domingo, M., Schönian, G., Zahner, H., & Burkhardt, E. (2002). Cutaneous leishmaniosis in a horse in southern Germany caused by Leishmania infantum. Veterinary Parasitology, 109(1), 9-17. doi: 10.1016/S0304-4017(02)00246-7

Kuhls, K., Mauricio, I. L., Pratlong, F., Presber, W., & Schönian, G. (2005). Analysis of ribosomal DNA internal transcribed spacer sequences of the Leishmania donovani complex. Microbes and Infection, 7(11-12), 1224-1234. doi: doi.org/10.1016/j.micinf.2005.04.009

Lainson, R., & Rangel, E. F. (2005). Lutzomyia longipalpis and the eco-epidemiology of American visceral leishmaniasis, with particular reference to Brazil: a review. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, 100(8), 811-827. doi: 10.1590/S0074-02762005000800001

le Fichoux, Y., Quaranta, J.-F., Aufeuvre, J.-P., Lelievre, A., Marty, P., Suffia, I.,… Kubar, J. (1999). Occurrence of Leishmania infantum parasitemia in asymptomatic blood donors living in an area of endemicity in southern France. Journal of Clinical Microbiology, 37(6), 1953-1957.

Lombardi, M. C., Turchetti, A. P., Tinoco, H. P., Pessanha, A. T., Soave, S. A., Malta, M. C.,… Santos, R. L. (2014). Diagnosis of Leishmania infantum infection by polymerase chain reaction in wild mammals. Pesquisa Veterinária Brasileira, 34(12), 1243-1246. doi: 10.1590/S0100-736X2014001200017

Lombardo, G., Pennisi, M. G., Lupo, T., Chicharro, C., & Solano-Gallego, L. (2014). Papular dermatitis due to Leishmania infantum infection in seventeen dogs: diagnostic features, extent of the infection and treatment outcome. Parasites & Vectors 7(1), 120-131. doi: 10.1186/1756-3305-7-120

Lopes, E., Sevá, A., Ferreira, F., Nunes, C., Keid, L., Hiramoto, R., . . . Galvis-Ovallos, F. (2017). Serological and molecular diagnostic tests for canine visceral leishmaniasis in Brazilian endemic area: one out of five seronegative dogs are infected. Epidemiology & Infection, 145(12), 2436-2444. Retrived from https://doi-org.ez96.periodicos.capes.gov.br/10.1017/S0950268817001443

Lukeš, J., Guilbride, D. L., Votýpka, J., Zíková, A., Benne, R., & Englund, P. T. (2002). Kinetoplast DNA network: evolution of an improbable structure. Eukaryotic cell, 1(4), 495-502. doi: 10.1128/EC.1.4.495-502.2002

Macedo-Silva, V. P., Martins, D. R., Queiroz, P. V. S. de., Pinheiro, M. P. G., Freire, C. C., Queiroz, J. W., . . . Jeronimo, S. M. (2014). Feeding preferences of Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae), the sand fly vector, for Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). Journal of Medical Entomology 51(1), 237-244. doi: 10.1603/ME12131

Müller, N., Hentrich, B., Frey, C. F., & Welle, M. (2015). Quantitative PCR for the diagnosis of cutaneous leishmaniasis from formalin-fixed and paraffin-embedded skin sections. Molecular and Cellular Probes, 29(6), 507-510. doi: 10.1016/j.mcp.2015.09.008

Müller, N., Welle, M., Lobsiger, L., Stoffel, M. H., Boghenbor, K. K., Hilbe, M.,… Von Bomhard, W. (2009). Occurrence of Leishmania sp. in cutaneous lesions of horses in Central Europe. Veterinary Parasitology, 166(3), 346-351. doi: 10.1016/j.vetpar.2009.09.001

Pandey, K., Pant, S., Kanbara, H., Shuaibu, M. N., Mallik, A. K., Pandey, B. D.,… Yanagi, T. (2008). Molecular detection of Leishmania parasites from whole bodies of sandflies collected in Nepal. Parasitology Research, 103(2), 293-297. doi: 10.1007/s00436-008-0967-7

Pita-Pereira, D., Lins, R., Oliveira, M. P., Lima, R. B., Pereira, B. A., Moreira, O. C.,... Britto, C. (2012). SYBR Green-based real-time PCR targeting kinetoplast DNA can be used to discriminate between the main etiologic agents of Brazilian cutaneous and visceral leishmaniasis. Parasites & Vectors, 5(1), 5-15. doi: 10.1186/1756-3305-5-15

Sambrook, J., & Russel, D. W. (2001). Molecular cloning: a laboratory manual (Rev. ed.). (Chap. 1, pp. 21-27). New York: Cold Spring Harbor: Cold spring harbor laboratory press.

Schönian, G., Nasereddin, A., Dinse, N., Schweynoch, C., Schallig, H. D., Presber, W., & Jaffe, C. L. (2003). PCR diagnosis and characterization of Leishmania in local and imported clinical samples. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 47(1), 349-358.

Schönian, G., Schnur, L., El Fari, M., Oskam, L., Kolesnikov, A. A., Sokolowska-Köhler, W., & Presber, W. (2001). Genetic heterogeneity in the species Leishmania tropica revealed by different PCR-based methods. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 95(2), 217-224. doi: 10.1016/S0035-9203(01)90173-7

Silva, A. F. da, Damasceno, Á. R. A., Prado, W. S., Caldeira, R. D., Sampaio-Junior, F. D., Farias, D. M. de, . . . G., Scofield, A. (2017). Leishmania infantum infection in dogs from maroon communities in the Eastern Amazon. Ciência Rural, 47, e20160025. doi: 10.1590/0103-8478cr20160025

Silva, M. A. L. da, Medeiros, R. A., Brandão-Filho, S., Melo, F. L., & Medeiros, Z. (2010). Alvos moleculares utilizados em PCR para o diagnóstico da leishmaniose visceral humana. Revista Eletrônica de Farmácia, 7(3), 1-15. doi: 10.5216/ref.v7i3.12947

Silva, R. C., Richini-Pereira, V. B., Kikuti, M., Marson, P. M., & Langoni, H. (2017). Detection of Leishmania (L.) infantum in stray dogs by molecular techniques with sensitive species-specific primers. Veterinary Quarterly, 37(1), 23-30. doi: 10.1080/01652176.2016.1252073

Soares, I. R., Silva, S. O., Moreira, F. M., Prado, L. G., Fantini, P., Maranhão, R. de P. A.,... Palhares, M. S. (2013). First evidence of autochthonous cases of Leishmania (Leishmania) infantum in horse (Equus caballus) in the Americas and mixed infection of Leishmania infantum and Leishmania (Viannia) braziliensis. Veterinary Parasitology, 197(3), 665-669. doi: 10.1016/j.vetpar.2013.06.014

Solano-Gallego, L., Fernàndez-Bellon, H., Serra, P., Gállego, M., Ramis, A., Fondevila, D., & Ferrer, L. (2003). Cutaneous leishmaniosis in three horses in Spain. Equine Veterinary Journal, 35(3), 320-323. R doi: 10.2746/042516403776148336:

Solcà, M. da S., Guedes, C. E. S., Nascimento, E. G., Oliveira, G. G. de S., Santos, W. L. C. dos, Fraga, D. B. M., & Veras, P. S. T. (2012). Qualitative and quantitative polymerase chain reaction (PCR) for detection of Leishmania in spleen samples from naturally infected dogs. Veterinary Parasitology, 184(2-4), 133-140. doi: 10.1016/j.vetpar.2011.08.026

Souza, N. P., Almeida, A. do B. P. F. de, Freitas, T. P. T. de, Paz, R. C. R. da, Dutra, V., Nakazato, L., & Sousa, V. R. F. (2010). Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em canídeos silvestres mantidos em cativeiro, no Estado de Mato Grosso. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 43(3), 333-335. doi: 10.1590/S0037-86822010000300024

Truppel, J. H., Otomura, F., Teodoro, U., Massafera, R., Costa-Ribeiro, M. C. V. da, Catarino, C. M.,... Thomaz-Soccol, V. (2014). Can equids be a reservoir of Leishmania braziliensis in endemic areas? PLoS ONE, 9(4), e93731. doi: 10.1371/journal.pone.0093731

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Publicado

2020-01-10

Como Citar

Escobar, T. A., Döwich, G., Cantele, L. C., Góss, G. C., Porciúncula, M. L., Leite, C. T., … Lubeck, I. (2020). Aplicação da reação em cadeia da polimerase na detecção da infecção por Leishmania sp. em equinos. Semina: Ciências Agrárias, 41(1), 199–212. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2020v41n1p199

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