Isolamento de RNA total de alta qualidade a partir de frutos de melão (Cucumis melo L.) contendo altos níveis de polissacarídeos

Autores

  • Gabrielle Silveira de Campos Universidade Estadual de Ponta Grossa
  • Ricardo Antônio Ayub Universidade Estadual de Ponta Grossa
  • Rafael Mazer Etto Universidade Estadual de Ponta Grossa
  • Carolina Weigert Galvão Universidade Estadual de Ponta Grossa
  • Marília Aparecida Stroka Universidade Estadual de Ponta Grossa
  • Juliana Inaba Universidade Estadual de Ponta Grossa

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2017v38n4p2201

Palavras-chave:

Metodologias de extração de RNA, Qualidade do RNA, Melão.

Resumo

O melão pertencente à família Cucurbitaceae é o quarto fruto mais importante no mercado mundial e a fruta mais exportada pelo Brasil. Muitas técnicas moleculares utilizadas para compreender a maturação destes frutos requerem o uso de RNA altamente purificado e em alta concentração. Entretanto, o elevado nível de compostos polifenólicos e polissacarídeos nos frutos tornam a extração de RNA um desafio. Este trabalho teve por objetivo determinar o método mais adequado para extração de RNA total em frutos de melão. Seis diferentes tampões de extração foram testados: T1) tiocianato de guanidina/fenol/clorofórmio; T2) azida de sódio/?-mercaptoetanol; T3) fenol/tiocianato de guanidina, T4) CTAB/PVP/?-mercaptoetanol, T5) SDS/perclorato de sódio/PVP/?-mercaptoetanol e T6) sarcosil/PVP/tiocianato de guanidina associado com AxyPrep TM Multisource Total RNA Miniprep Kit. O melhor método para extração do RNA tanto de fruto verde quanto maduro foi o baseado no tampão SDS/PVP/?-mercaptoetanol, por gerar material íntegro e de qualidade em grande quantidade, associado à rapidez de execução. Em geral, maiores quantidades de RNA foram obtidas a partir de frutos verdes, provavelmente devido à baixa concentração de polissacarídeos e água. O material purificado poderá ser utilizado como molde em técnicas de estudos moleculares como microarrays, RT-PCR e bibliotecas de cDNA e RNAseq, pelo qual foi testado.

Biografia do Autor

Gabrielle Silveira de Campos, Universidade Estadual de Ponta Grossa

Discente, Curso de Graduação em Farmácia, UEPG, Ponta Grossa, PR, Brasil.

Ricardo Antônio Ayub, Universidade Estadual de Ponta Grossa

Prof. Associado, Universidade Estadual de Ponta Grossa, UEPG, Departamento de Fitotecnia, Ponta Grossa, PR, Brasil.

Rafael Mazer Etto, Universidade Estadual de Ponta Grossa

Prof. Adjunto, UEPG, Departamento de Química, Ponta Grossa, PR, Brasil.

Carolina Weigert Galvão, Universidade Estadual de Ponta Grossa

Profª Adjunta, UEPG, Departamento de Biologia Estrutural, Molecular e Genética, Ponta Grossa, PR, Brasil.

Marília Aparecida Stroka, Universidade Estadual de Ponta Grossa

Discente, Curso de Graduação em Agronomia, UEPG, Ponta Grossa, PR, Brasil.

Juliana Inaba, Universidade Estadual de Ponta Grossa

Profa, Adjunto, UEPG, Departamento de Química, Ponta Grossa, PR, Brasil.

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Publicado

2017-08-04

Como Citar

Campos, G. S. de, Ayub, R. A., Etto, R. M., Galvão, C. W., Stroka, M. A., & Inaba, J. (2017). Isolamento de RNA total de alta qualidade a partir de frutos de melão (Cucumis melo L.) contendo altos níveis de polissacarídeos. Semina: Ciências Agrárias, 38(4), 2201–2208. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2017v38n4p2201

Edição

v. 38 n. 4 (2017)

Seção

Comunicações

Licença

Copyright (c) 2017 Semina: Ciências Agrárias

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