Clonagem, expressão e diversidade na seqüência do gene iss de Escherichia coli patogênica para aves (APEC), isolada no Brasil

Abstract

A proteína Iss (increased serum survival) é uma importante característica de resistência ao sistema complemento da Escherichia coli patogênica para aves (APEC). Os objetivos deste trabalho foram clonar e verificar a diversidade da seqüência do gene iss de APEC e caracterizar a proteína Iss recombinante. O gene iss de 309 bp foi amplificado por PCR, clonado e expresso na E. coli BL21 (DE3) utilizando o vetor pET SUMO. O gene iss da APEC9 foi classificado como iss tipo 1 pela diferenciação entre 3 tipos de iss alelos. A proteína Iss foi expressa pela indução com IPTG, purificada em coluna com resina ligada ao íon níquel e utilizada na imunização de galinhas poedeiras. Anticorpos da classe IgY anti rIss reagiram com a proteina rIss, a qual apresentou massa molecular de 22 kDa, correspondendo 11kDa da Iss e 11 kDa da proteína SUMO.