Análise comparativa de cinco protocolos de isolamento de DNA e três métodos de secagem de amostras foliares de Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez

Resumo

O objetivo do estudo foi estabelecer um protocolo de isolamento de DNA de Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez., capaz de obter amostras de alto rendimento e qualidade para emprego em análises genômicas. Foram testados um kit comercial e quatro métodos clássicos de extração de DNA, incluindo três métodos baseados em brometo de cetiltrimetilamónio (CTAB) e um baseado em dodecil sulfato de sódio (SDS). Três métodos de secagem de amostras de folhas foram também avaliados, incluindo a secagem à temperatura ambiente (RT), em estufa a 40ºC (S40), e em forno microondas (FMO). As soluções de DNA obtidas a partir de diferentes tipos de amostras foliares utilizando os cinco protocolos foram avaliadas em termos de custo, tempo de execução e qualidade e rendimento de DNA extraído. O kit comercial não extraiu DNA com quantidade ou qualidade suficiente para o sucesso das reações de PCR. Entre os métodos clássicos, apenas os protocolos Dellaporta e Khanuja proporcionaram extração de DNA para os três tipos de amostras foliares, que resultaram em reações de PCR e ensaios com enzimas de restrição bem sucedidos. Com base nas variáveis avaliadas, o método de extração de DNA mais apropriado para Nectandra megapotamica (Spreng.) Mez. foi o Dellaporta, independentemente do método utilizado para secar as amostras. O método selecionado apresenta custo e tempo de execução total relativamente baixo. Além disso, a qualidade e quantidade do DNA extraído utilizando o método foram suficientes para amplificação de fragmentos de DNA por meio de reações de PCR e para obter fragmentos de restrição.