Organogênese e seleção por canamicina de plantas de morangueiro in vitro visando a transformação genética

Abstract

O sucesso da transformação genética do morangueiro (Fragaria x ananassa) é grandemente influenciado pela cultivar utilizada e dependente da eficiente regeneração e seleção do material transformado. Na regeneração das plantas, a organogênese depende da concentração de reguladores de crescimento presente no meio de cultivo e varia de acordo com a fonte de explante e a cultivar utilizada. Da mesma forma, na seleção das plantas transformadas, a sensibilidade à agentes seletivos induzida por genes marcadores, depende da concentração da substância seletiva no meio de regeneração e deve ser ajustada de acordo com a cultivar utilizada. O objetivo deste trabalho foi testar diferentes combinações e concentrações de TDZ (Thidiazuron) e AIB (Ácido Indolbutírico) adicionados ao meio básico MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) para a regeneração de brotos das cvs. Camiño Real e Festival a partir de explantes foliares e explantes peciolares. Para a cv. Camiño Real foram testados 1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1 de TDZ combinadas com 0,1; 0,3 e 0,5 mg L-1 de AIB e para a cv. Festival foram testados 1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1 de TDZ combinados com 0,1 e 0,3 mg L-1 de AIB. A partir dos resultados de regeneração, também se buscou definir a menor concentração do agente seletivo canamicina (gene marcador npt II), capaz de inibir a regeneração de brotos não transformados, testando-se adições de 0, 2, 4, 6, 8 e 10mg L-1 de canamicina ao meio de regeneração pré-estabelecido. Para ambas as cultivares não foram obtidos brotos com desenvolvimento normal a partir de explantes peciolares, sendo avaliadas apenas a regeneração e sensibilidade à canamicina de brotos regenerados a partir de explantes foliares. Para a cv. Camiño Real foi estabelecida a melhor regeneração de brotos na combinação 2,0mg L-1 de TDZ + 0,1mg L-1 de AIB enquanto que para a cv. Festival foram 2,5mg L-1 de TDZ + 0,1mg L-1 de AIB. Com relação a sensibilidade à canamicina, foi observada total inibição de brotos com 10mg L-1 de canamicina para ambas as cultivares estudadas.