Influência da adição do glicerol sobre a qualidade dos espermatozoides epididimários de gato durante as etapas da congelação-descongelação

Autores

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2020v41n4p1237

Palavras-chave:

Criodanos. Criopreservação, Espermatozoide, Felino, Crioprotetor intracelular.

Resumo

A criopreservação dos espermatozoides epididimários é uma ferramenta útil para preservar o potencial genético de um animal valioso. Além disso, o gato doméstico é modelo eleito para o estudo e desenvolvimento da criogenia para os demais felinos. Contudo, para o sucesso dessa biotécnica é essencial o controle de todo o processo de criopreservação. Assim, objetivou-se avaliar o efeito do tempo de equilíbrio da glicerolização e das etapas da congelação-descongelação sobre a qualidade dos espermatozoides epididimários de gato doméstico. Para tanto, espermatozoides epididimários foram recuperados com TRIS e imediatamente avaliados quanto à motilidade total (MT), vigor, viabilidade, funcionalidade de membrana (HOST) e morfologia. Em seguida, as amostras foram adicionadas de TRIS-gema a 20%, fracionadas igualmente em dois tubos de 1,5 mL, refrigeradas a 4 ºC por 1 hora e, posteriormente, adicionadas de glicerol na concentração final de 5%. As amostras foram incubadas com glicerol (tempo de equilíbrio) por 5 ou 10 minutos (grupos G5 e G10, respectivamente) e depois congeladas. A descongelação ocorreu a 37 ºC por 30 segundos. As amostras foram avaliadas em todas as etapas. Uma redução na MT foi observada apenas na pós-descongelação, no entanto G5 (39,00 ± 4,07%) foi superior ao G10 (18,50 ± 4,54%). O vigor declinou pós-descongelação em ambos os grupos; contudo, não diferiram entre si. A viabilidade espermática foi mantida no G5 pós-glicerolização (53,60 ± 2,59%), diferentemente do observado em G10, em que a amostra glicerolizada (48,80 ± 2,93%) reduziu em relação à fresca (59,90 ± 1,74%). A viabilidade pós-descongelação de G5 (33,80 ± 1,89%) foi superior à de G10 (18,80 ± 3,01%). No HOST, uma redução da viabilidade só foi observada pós-descongelação, não havendo diferença entre os grupos (41,50 ± 2,84% para G5 e 40,20 ± 3,49% para G10). Em relação à morfologia espermática, os espermatozoides normais diminuíram, enquanto os espermatozoides com defeitos secundários pós-descongelação aumentaram em ambos os grupos. Conclui-se que um menor tempo de equilíbrio para a glicerolização preserva melhor a qualidade dos espermatozoides epididimários e a etapa mais crítica do processo de congelação-descongelação é a descongelação.

Métricas

Carregando Métricas ...

Biografia do Autor

Brenna de Sousa Barbosa, Universidade Estadual do Ceará

M.e, Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará, UECE, Fortaleza, CE, Brasil.

Herlon Victor Rodrigues Silva, Universidade Estadual do Ceará

Dr., Faculdade de Veterinária, UECE, Fortaleza, CE, Brasil.

Ticiana Franco Pereira da Silva, Universidade Estadual do Ceará

Dra, Faculdade de Veterinária, UECE, Fortaleza, CE, Brasil.

Lúcia Daniel Machado da Silva, Universidade Estadual do Ceará

Profª Drª, Faculdade de Veterinária, UECE, Fortaleza, CE, Brasil.

Referências

Almeida, F. C., Silva, S. V., Souza, H. M., Gomes, W. A., Lima, J. A. C., Fº., Wicke, A. A.,… Guerra, M. M. P. (2017). Effects of glycerol, equilibration time and antioxidants on post‐thaw functional integrity of bovine spermatozoa directly obtained from epididymis. Andrologia, 49(3), e12623. doi: 10.1111/and.12623

Amstislavsky, S., Lindeberg, H., & Luvoni, G. C. (2012). Reproductive technologies relevant to the genome resource bank in Carnivora. Reproduction in Domestic Animals, 47(1), 164-175. doi: 10.1111/j.1439-0531.2011.01886.x

Axnér, E., Hermansson, U., & Linde-Forsberg, C. (2004). The effect of Equex STM paste and sperm morphology on post-thaw survival of cat epididymal spermatozoa. Animal Reproduction Science, 84(1-2), 179-191. doi:10.1016/j.anireprosci.2003.11.003

Bogliolo, L., Bonelli, P., Madau, L., Zedda, M. T., Santucciu, C., Leoni, G.,... Ledda, S. (2004). Fertilizing ability of epididymal cat spermatozoa after cryopreservation or storage at 4 °C. Reproduction, Fertility and Development, 16(2), 222-222. doi: 10.1071/RDv16n1Ab202

Buranaamnuay, K. (2015). Determination of appropriate cryopreservation protocols for epididymal cat spermatozoa. Reproduction in Domestic Animals, 50(3), 378-385. doi: 10.1111/rda.12496

Buranaamnuay, K. (2017). Protocols for sperm cryopreservation in the domestic cat: a review. Animal Reproduction Science, 183(1), 56-65. doi: 10.1016/j.anireprosci.2017.06.002

Buranaamnuay, K. (2018). Cryopreservation and storage of cat epididymal sperm using‒75° C freezer vs liquid nitrogen. Animal Reproduction Science, 191(1), 56-63. doi: 10.1016/j.anireprosci.2018.02.008

Burg, M. B., Ferraris J. D., & Dmitrieva, N. I. (2007). Cellular response to hyperosmotic stresses. Physiological Reviews, 87(4), 1441-1474. doi: 10.1152/physrev.00056.2006

Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (2013). Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 3a ed. Belo Horizonte, MG: CBRA.

Chatdarong, K. (2017). Retained fertilizing capability in cryopreserved feline spermatozoa. Reproduction in Domestic Animals, 52(2), 261-264. doi: 10.1111/rda.12855

Cheuquemán, C., Faúndez, R., Sánchez, R., & Risopatrón, J. (2018). Changes in sperm function and structure after freezing in domestic cat spermatozoa. Andrologia, 50(9), e13080. doi: 10.1111/and.13080

Cheuquemán, C., Sánchez, R., & Risopatrón, J. (2017). Effect of sperm selection techniques in frozen/thawed cat spermatozoa on sperm motility analyzed by CASA System. International Journal of Morphology, 35(4), 1495-1501. doi: 10.4067/S0717-95022017000401495

Cocchia, N, Ciani, F., El-Rass, R., Russo, M., Borzacchiello, G., Esposito, V.,... Lorizio, R. (2010). Cryopreservation of feline epididymal spermatozoa from dead and alive animals and its use in assisted reproduction. Zygote, 18(1), 1-8. doi: 10.1017/S0967199409990256

Costa, L. L. M., Castelo, T. S., Souza, A. L. P., Lima, G. L., & Silva, A. R. (2013). Criopreservação de sêmen canino em diluente Tris adcionado de dodecil sulfato de sódio. Revista Brasileira Reprodução Animal, 37(1), 53-58. Recuperado de https://cbra.websiteseguro.com/pages/publicacoes/rbra/v37n1/p53-58%20 (RB386).pdf

Deco-Souza, T., Paula, T. A. R., Costa, D. S., Costa, E. P., Barros, J. B. G., Araujo, G. R., & Carreta, M., Jr. (2013). Comparação entre duas concentrações de glicerol para a criopreservação de sêmen de suçuarana (Puma concolor). Pesquisa Veterinária Brasileira, 33(4), 512-516. doi: 10.1590/S0100-736X2013000400015

Di Domenico, D., Pedroso, E. M. S. R., & Teixeira, P. P. M. (2015) Diferenças da célula espermática suína e crioprotetores: Revisão. Nucleus Animalium, 7(1), 1-5. doi: 10.3738/1982.2278.1169

Figueroa, E., Valdebenito, I., & Farias, J. G. (2016). Technologies used in the study of sperm function in cryopreserved fish spermatozoa. Aquaculture Research, 47(6), 1691-1705. doi: 10.1111/are.12630

García, B. M., Ferrusola, C. O., Aparicio, I. M., Miró-Morán, A., Morillo-Rodriguez, A., Bolaños, J. M. G.,… Peña, F. J. (2012). Toxicity of glycerol for the stallion spermatozoa: effects on membrane integrity and cytoskeleton, lipid peroxidation and mitochondrial membrane potential. Theriogenology, 77(7), 1280-1289. doi: 10.1016/j.theriogenology.2011.10.033

García-Vazquez, F. A., Gadea, J., Matás, C., & Holt, W. V. (2016). Importance of sperm morphology during sperm transport and fertilization in mammals. Asian Journal of Andrology, 18(6), 844-850. doi: 10.4103/1008-682X.186880

Guerra, M. M. P., Souza, A. F., Soares, A. T., César, C. N. R., Silva, S. V., & Batista, A. M. (2009). Aspectos críticos da congelação do sêmen caprino. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 1(Supl. 6), 42-49. Recuperado de https://cbra.websiteseguro.com/pages/publicacoes/rbra/download/p42-49.pdf

Hartwig, F. O. P., Papa, F. O., & Dell’Aqua, J. A. J. (2012). Utilização do colesterol na criopreservação de espermatozóides na espécie equina: uma revisão. Veterinária e Zootecnia, 19(2), 157-168. Recuperado de https://repositorio.unesp.br/bitstream/handle/11449/141277/ISSN0102-5716-2012-19-02-157-168.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Jeyendran, R. S., Van Der Ven, H. H., Perez-Pelaez, M., Crabo, B. G., & Zaneveld, L. J. (1984). Development of an assay to assess the functional integrity of the human sperm membrane and its relationship to other semen characteristics. Reproduction, 70(1), 219-28. doi: 10.1530/jrf.0.0700219

Jiménez, E., Pérez-Marín, C. C., Vizuete, G., Millán, Y., & Agüera, E. I. (2013). Effect of different extenders on in vitro characteristics of feline epididymal sperm during cryopreservation. Reproduction in Domestic Animals, 48(4), 665-672. doi: 10.1111/rda.12142

Klaus, C., Eder, S., Franz, C., & Müller, K. (2016). Successful cryopreservation of domestic cat (Felis catus) epididymal sperm after slow equilibration to 15 or 10°C. Reproduction in Domestic Animals, 51(2), 195-203. doi: 10.1111/rda.12666

Kunkitti, P., Chatdarong, K., Suwimonteerabutr, J., Nedumpun, T., Johannisson, A., Bergqvist, A.,… Axnér, E. (2017). Osmotic tolerance of feline epididymal spermatozoa. Animal Reproduction Science, 185(1), 148-153. doi: 10.1016/j.anireprosci.2017.08.014

Leite, T. G., Vale, V. R., Fº., Arruda, R. P., Andrade, A. F. C., Emerick, L. L., Zaffalon, F. G.,… Andrade, V. J. (2010). Effects of extender and equilibration time on post-thaw motility and membrane integrity of cryopreserved Gyr bull semen evaluated by CASA and flow cytometry. Animal Reproduction Science, 120(4), 31-38. doi.org/10.1016/j.anireprosci.2010.04.005

Luvoni, G. C. & Morselli, M. G. (2017). Canine epididymal spermatozoa: A hidden treasure with great potential. Reproduction in Domestic Animals, 52(2), 197-201. doi: 10.1111/rda.12820

Martins, J. L. A., Villaverde, A. I. S. B., Lima, A. F. M., Steagall, P. V. M., Ferreira, J. C. P., Taconeli, C. A., & Lopes, M. D. (2009). Impact of 24‐h cooling prior to freezing on the survival of domestic cat (Felis catus) epididymal sperm. Reproduction in Domestic Animals, 44(2), 366-368. doi: 10.1111/j.1439-0531.2009.01432.x

Oliveira, R. A. (2013). Criopreservação de sêmen equino, um desafio a ser vencido. PUBVET, 7(26), 2678-2755. Recuperado de http://www.pubvet.com.br

Oliveira, R. V., Nunes, J. F., Salgueiro, C. C. M., Cavalcante, J. M. M., Brasil, O. O., & Moura, A. A. A. N. (2009). Avaliação de espermatozóides caprinos congelados em meio à base de água de coco em pó (ACP-101®) ou TRIS. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, 63(6), 1295-1302. doi: 10.1590/S010209352011000600003

Ozkavukcu, S., Erdemli, E., Isik, A., Oztuna, D., & Karahuseyinoglu, S. (2008). Effects of cryopreservation on sperm parameters and ultrastructural morphology of human spermatozoa. Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 25(8), 403-411. doi: 10.1007/s10815-008-9232-3

Prochowska, S., Niżański, W., & Partyka, A. (2016). Comparative analysis of in vitro characteristics of fresh and frozen-thawed urethral and epididymal spermatozoa from cats (Felis domesticus). Theriogenology, 86(8), 2063-2072. doi: 10.1016/j.theriogenology.2016.07.002

Raskin, R. E., Meyer, D. J. (2011). Citologia Clínica de Cães e Gatos: Atlas Colorido e Guia de Interpretação (2a ed.). Rio de Janeiro: Elsevier Brasil.

Santos, M. A. M., Gradela, A., Moraes, E. A., Souza, W. L., Alves, N. G., Costa, J. M. S. C., & Matos, W. C. G. (2015). Características do sêmen a fresco e descongelado de garanhões da raça Nordestina. Pesquisa Veterinária Brasileira, 35(11), 925-932. doi: 10.1590/S0100-736X2015001100009

Silva, E. C. B., & Guerra, M. M. P. (2012). Aspectos fundamentais da morfofisiologia e criopreservação espermática em pequenos ruminantes. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 36(3), 181-187. Recuperado de https://cbra.websiteseguro.com/pages/publicacoes/rbra/v36n3/p181-187%20(RB383).pdf

Silva, S. V., & Guerra, M. M. P. (2011). Efeitos da criopreservação sobre as células espermáticas e alternativas para redução das crioinjúrias. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 35(4), 370-384. Recuperado de https://www.researchgate.net/profile/Sildivane_Silva2/publication/291771381_Efeitos_da_ criopreservacao_sobre_as_celulas_espermaticas_e_alternativas_para_reducao_das_crioinjurias/links/5a8489d60f7e9b2c3f501e46/Efeitos-da-criopreservacao-sobre-as-celulas-espermaticas-e-alternativas-para-reducao-das-crioinjurias.pdf.

Silva, T. F. P. (2008). Avaliação andrológica, métodos de coleta e tecnologia do sêmen de gatos domésticos utilizando água de coco em pó (ACP-117®). Tese de doutorado, Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará, Fortaleza, CE, Brasil.

Tebet, J. M., Martins, M. I. M., Chirinea, V. H., Souza, F. F. D., Campagnol, D., & Lopes, M. D. (2006). Cryopreservation effects on domestic cat epididymal versus electroejaculated spermatozoa. Theriogenology, 66(6-7), 1629-1632. doi: 10.1016/j.theriogenology.2006.02.013

Thuwanut, P., & Chatdarong, K. (2009). Incubation of post‐thaw epididymal cat spermatozoa with seminal plasma. Reproduction in Domestic Animals, 44(2), 381-384. doi: 10.1111/j.1439-0531.2009.01436.x

Thuwanut, P., Arya, N., Comizzoli, P., & Chatdarong, K. (2015). Effect of extracellular adenosine 5′-triphosphate on cryopreserved epididymal cat sperm intracellular ATP concentration, sperm quality, and in vitro fertilizing ability. Theriogenology, 84(5), 702-709. doi: 10.1016/j.theriogenology.2015.05.003

Thuwanut, P., Chatdarong, K., Techakumphu, M., & Axnér, E. (2008). The effect of antioxidants on motility, viability, acrosome integrity and DNA integrity of frozen-thawed epididymal cat spermatozoa. Theriogenology, 70(2), 233-240. doi: 10.1016/j.theriogenology.2008.04.005

Tittarelli, C., Savignone, C. A., Arnaudín, E., Stornell, M. C., Stornelli, M. A., & Sota, R. L. I. (2006). Effect of storage media and storage time on survival of spermatozoa recovered from canine and feline epididymides. Theriogenology, 66(1), 637-640. doi: 10.1016/j.theriogenology.2006.01.021

VillaVerde, A. I. S. B., Melo, C. M., Martin, I., Ferreira, T. H., Papa, F. O., Taconeli, C. A., & Lopes, M. D. (2009). Comparison of efficiency between two artificial insemination methods using frozen-thawed semen in domestic cat (Felis catus): Artificial insemination in domestic cats. Animal Reproduction Science, 114(4), 434-442. doi: 10.1016/j.anireprosci.2008.10.008

VillaVerde, A. I., Fioratti, E. G., Penitenti, M., Ikoma, M. R. V., Tsunem, M. H., Papa, F. O., & Lopes, M. D. (2013). Cryoprotective effect of different glycerol concentrations on domestic cat spermatozoa. Theriogenology, 80(7), 730-737. doi: 10.1016/j.theriogenology.2013.06.010

Zambelli, D., Caneppele, B., Castagnetti, C., & Belluzzi, S. (2002). Cryopreservation of cat semen in straws: comparison of five different freezing rates. Reproduction Domestical Animals, 37(5), 310-313. doi: 10.1046/j.1439-0531.2002.00365.x Retrieved from https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1046/ j.1439-0531.2002.00365.x

Downloads

Publicado

2020-05-13

Como Citar

Barbosa, B. de S., Silva, H. V. R., Silva, T. F. P. da, & Silva, L. D. M. da. (2020). Influência da adição do glicerol sobre a qualidade dos espermatozoides epididimários de gato durante as etapas da congelação-descongelação. Semina: Ciências Agrárias, 41(4), 1237–1246. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2020v41n4p1237

Edição

Seção

Artigos