Eficiência da fervura e outros quatro métodos para extração do DNA genômico de bactérias esporuladas deteriorantes do leite

Autores

  • Jose Carlos Ribeiro Junior Universidade Estadual de Londrina
  • Ronaldo Tamanini Universidade Estadual de Londrina
  • Bruna Fritegoto Soares Universidade Estadual de Londrina
  • Aline Marangon de Oliveira Universidade Estadual de Londrina
  • Fernando de Godoi Silva Universidade Estadual de Londrina
  • Francine Fernandes da Silva Universidade Estadual de Londrina
  • Nayara Assis Augusto Universidade Estadual de Londrina
  • Vanerli Beloti Universidade Estadual de Londrina

DOI:

https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n5p3069

Palavras-chave:

Bacillus, Esporos, Paenibacillus, PCR.

Resumo

A microbiota esporulada é a principal responsável pela deterioração do leite pasteurizado de longa vida útil nos Estados Unidos. A identificação destes micro-organismos é de especial importância para a qualidade do leite e ferramentas moleculares são fundamentais nesse processo. No entanto, exigem a execução de etapas onerosas e laboriosas que podem inviabilizar algumas pesquisas. O objetivo do presente trabalho foi comparar a eficiência do método de extração de DNA por fervura com outros quatro métodos para extração de DNA genômico de bactérias esporuladas com potencial proteolítico e lipolítico isoladas do leite cru dos estados do Paraná e Maranhão, Brasil. Foram utilizados protocolos que se baseavam na lise celular por digestão enzimática, agitação com fenol, aquecimento em micro-ondas, tiocianato de guanidina e este trabalho propõe um método por fervura simples para o estudo desses micro-organismos. Observaram-se variações nos métodos de quantificação do DNA extraído e baixo coeficiente de correlação de Person entre esses métodos. No entanto, observou-se que tanto no protocolo de lise celular por digestão enzimática (kit comercial) quanto na fervura simples proposta pelo presente estudo, houve êxito na realização da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para pesquisa dos genes rpoB e 16S rRNA para todas as 11 cepas de micro-organismos testadas. Os outros protocolos não apresentaram sucesso na extração de DNA para a totalidade da microbiota avaliada, já que somente algumas amostras tiveram êxito nas reações de PCR, fato que os inviabiliza para a pesquisa desses micro-organismos. Dessa forma, o método de fervura simples das suspensões de bactérias esporuladas deteriorantes do leite demonstrou a mesma eficiência do kit comercial para a extração do DNA desses micro-organismos, sendo um método de baixo custo e de fácil e rápida execução.

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Biografia do Autor

Jose Carlos Ribeiro Junior, Universidade Estadual de Londrina

Discente do Curso de Doutorado em Ciência Animal, Universidade Estadual de Londrina, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Ronaldo Tamanini, Universidade Estadual de Londrina

Dr. em Ciência Animal, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Bruna Fritegoto Soares, Universidade Estadual de Londrina

Discente do Curso de Graduação em Medicina Veterinária, Bolsista de Iniciação Científica, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Aline Marangon de Oliveira, Universidade Estadual de Londrina

Médica Veterinária, Residente em Inspeção de Leite e Derivados, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Fernando de Godoi Silva, Universidade Estadual de Londrina

Médico Veterinário, Residente em Inspeção de Leite e Derivados, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Francine Fernandes da Silva, Universidade Estadual de Londrina

Médica Veterinária, Residente em Inspeção de Leite e Derivados, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Nayara Assis Augusto, Universidade Estadual de Londrina

Médica Veterinária, Residente em Inspeção de Leite e Derivados, UEL, Londrina, PR, Brasil.

Vanerli Beloti, Universidade Estadual de Londrina

Profª Drª, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, UEL, Londrina, PR, Brasil.

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Publicado

2016-10-26

Como Citar

Ribeiro Junior, J. C., Tamanini, R., Soares, B. F., Oliveira, A. M. de, Silva, F. de G., Silva, F. F. da, Augusto, N. A., & Beloti, V. (2016). Eficiência da fervura e outros quatro métodos para extração do DNA genômico de bactérias esporuladas deteriorantes do leite. Semina: Ciências Agrárias, 37(5), 3069–3078. https://doi.org/10.5433/1679-0359.2016v37n5p3069

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