Caracterização e clonagem do gene uvrA de Corynebacterium pseudotuberculosis, agente infeccioso da linfadenite caseosa

Abstract

A Linfadenite caseosa é uma doença causada por Corynebacterium pseudotuberculosis que afeta ovinos e caprinos. O Reparo de DNA é vital para qualquer organismo, pois evita possíveis efeitos deletérios. O objetivo deste estudo foi caracterizar o gene uvrA de C.psudotuberculosis para futuros ensaios de complementação funcional. Análises in silico foram feitas para verificar os parâmetros físicos e químicos, busca por domínios conservados e modelagem da estrutura 3D. As análises mostram que a proteína tem um peso molecular de cerca de 104,3 kDa e um domínio conservado de exonuclease. A amplificação do gene uvrA foi realizada utilizando um kit de PCR Long Range e o inserto foi clonado no vetor pCR 2.1 TOPO. Linhagens de E. coli DH5a foram eletroporadas com o plasmídeo recombinante e depois estes foram digeridos com enzimas de restrição BamH1 e Xho1  para subsequente clonagem num vetor de expressão pProEX HTB. As construções serão confirmadas por sequenciamento.