EFEITO DO SILENCIAMENTO DA PKR ATRAVÉS DE RNA DE INTERFERÊNCIA NO CRESCIMENTO DO MELANOMA B16-F10.

Resumo

O presente trabalho utilizou a tecnologia do RNA de interferência no modelo de melanoma murino com o objetivo de investigar o papel da proteína quinase dependente de RNA sobre o crescimento tumoral. Cerca de 7x10⁵ células de melanoma B16-F10  foram transfectadas com shRNAs anti-PKR e Lipofectamina por 5 horas. O efeito do silenciamento foi analisado por PCR semi-quantitativo e Western blot após 24 e 48 horas de transfecção. Para os ensaios in vivo as células B16-F10 transfectadas com vetor psiSTRIKE PKR-2 shRNA foram inoculadas  pela via subcutânea em camundongos C57BL/6 e após 14 dias os camundongos foram sacrificados e o tumor removido e pesado. Nossos resultados demonstraram redução significativa da expressão do RNAm da PKR e da proteína após 48h de transfecção. A análise do peso tumoral indicou uma redução de 86% no crescimento tumoral indicando que esta quinase exerce um papel positivo na proliferação celular.